一，按材质分：
磁性琼脂糖微球
特点：
1. 亲水性强，温和的条件容易洗脱，不至于引起酶失活或蛋白质变性；
2. 表面惰性，非特异性吸附低，受pH影响小
3. 容量大，具有开放性的支撑骨架
4. 组织相容性好
5. 机械性能和力学性能较差
6. 溶胀程度会随溶剂性质变化
磁性二氧化硅微球
特点：
1. 机械强度相对较强
2. 化学稳定性较优
3. 硅胶自身结构空隙较多，容易造成表面大量的水存积，增加了化学反应的复杂性
4. 碱性条件下非常不稳定
5. 存在较大的非特异性吸附性
磁性聚丙烯酰胺/聚丙烯酸类高分子微球
特点：
1. 具有较好的亲水性
2. 良好的血液相容性
3. 与其他高分子化合物共聚，改善其力学性能和稳定性收缩过大，易产生缩孔
磁性聚苯乙烯微球
特点：
1. 机械强度高
2. 表面易功能化
3. 表面非离子相互作用弱
4. 交联聚苯乙烯能够在强酸强碱中保持稳定的结构
5. 微球粒径大小可控聚苯乙烯微球表面为疏水性，对某些蛋白存在非特异性，需要对表面进行功能化修饰
二，按照官能团分：
| 磁珠种类 | 常见活化方法 | 配体的反应位点 |
| 羟基磁珠 | CDI活化、溴化 | 氨基 |
| 羧基磁珠 | EDC活化，NHS活化 | 氨基 |
| 氨基磁珠 | 戊二醛活化 | 氨基 |
| 环氧基磁珠 |
| ——巯基、氨基 |
| NHS磁珠 |
| ——氨基 |
| SA磁珠 | 配体生物素标记 | 生物素 |
三，磁珠应用于化学发光免疫检测机理
1，免疫吸附种类
磁性微球表面固定抗原：将抗原固定在微球表面，吸附相应的抗体和残留有抗体活性的免疫复合物。
磁性微球表面固定抗体：将抗体固定在微球表面，吸附相应的抗原和残留有抗原活性的免疫复合物。
磁性微球表面固定补体：利用补体Clq与免疫复合物的Fc段结合吸附免疫复合物，如DNA-抗DNA抗体复合物。
磁性微球表面固定蛋白A/G/L：蛋白A/G/L固定在磁性微球表面，可吸附抗体和免疫复合物。
疏水结合型：磁珠表面为疏水性材质，能够与目标生物分子疏水作用力结合磁珠表面具有疏水性配体，能够与目标生物分子共价作用力结合对甲苯磺酰基磁珠+疏水蛋白 聚苯乙烯微球+磷酯类蛋白。
静电结合型：配体与被吸附物靠静电作用而结合。磁性微球表面为带阴离子基团的甲基白蛋白，可静电结合带阳离子基团的DNA-抗DNA抗体复合物。
四，磁珠用于化学发光领域的方法
间接法
间接法就是包被抗原，然后用酶标记的抗抗体检测样本中抗体，基本原理见图4，适合于检测对象是自身抗体的情况。间接法的优点：相对较方便，只要变换包被抗原就可以检测不同的项目。间接法的缺点：标本中的特异性抗体会竞争性的结合抗原，使结果出现假阴性。
操作步骤：
a)磁性微球表面固定抗原。
b)加入样本（含目标抗体）孵育，清洗。
c)加入酶标抗抗体孵育，清洗。
d)加发光底物，检测信号。
捕获法
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定，因此测定IgM抗体多用捕获法。基本原理如图5所示，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，去除IgG后测定特异性IgM。
图5. 采用捕获法进行化学发光检测基本原理
操作步骤：
a)将抗人IgM抗体连接在固相载体上形成固相抗人IgM，洗涤。
b)加入稀释的血清标本中的IgM抗体被固相抗体捕获洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
c)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合洗涤。
d)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合洗涤。
e)加底物显色，检测信号。
固相抗原竞争法
竞争法，是指受检抗体和酶标抗体竞争性的与磁珠表面抗原结合。固相抗原竞争法基本原理如图6所示。结合于固相载体的酶标抗体与受检抗体的量呈反比。若受检样本中无抗体，酶标抗体能够顺利与抗原结合，出现强信号。若受检样本中有抗体，则竞争性的占去了酶标抗体与抗原的结合，酶标抗体的结合力减弱，信号强度减弱。
图6. 采用固相抗原竞争法进行化学发光检测基本原理
操作步骤：
a)磁珠表面固定特异性抗原。
b)加受检标本和酶标抗原的混合液孵育。
c)加发光底物，检测信号。
双抗夹心（两步法）
双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法，基本原理如图7所示。
图7. 采用双抗夹心法（两步法）进行化学发光检测基本原理
操作步骤：
a)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂。
b)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时问，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
c)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量成正相关。
d)加发光底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
双抗夹心法（一步法）
在一步法测定中，应注意钩状效应（hook effect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果（如图8， 双抗夹心法及双位点一步法。缺点：假阴性）
图8. 采用双抗夹心法（一步法）进行化学发光检测基本原理
图9. 采用双抗夹心法（一步法）进行化学发光检测，当样本中抗原量较多是，容易出现假阴性。
操作步骤：
a)磁珠表面固定一抗。
b)加样本和酶标二抗孵育，清洗。
c)加发光底物，检测信号。
五，优质磁珠用于化学发光领域的特点
灵敏度高：生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，并保持大分子物质的原有生物活性。每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
稳定性好：生物素与亲和素间的作用是目前已知强度zui高的非共价作用，亲和常数（K）为1015mol/L，比抗原与抗体间的亲和力至少高1万倍。二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，pH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。
特异性强：亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可zui大限度地降低反应试剂的非特异作用。
普适性广：生物素-结合素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法，适合用于不同的项目体系。
其他：通用性强，可制成多种通用性试剂（如生物素化二抗）适用于不同的反应体系。
*来源于公众号：体外诊断IVD知识库，如有侵权，请联系删除